Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程之前逐渐扩展

从第一次显现显现出去甲自身抗微到显现显现出1DF白血病医学腹泻的成果叛将在成年人时期就有极佳的刻画，多个去甲自身抗微非典型的成年人里有70%在血清变换后10周内患白血病，而随访15年的成年人这一比叛将增大到84%。来得之下，占到医学1DF白血病一半以上的DF1DF白血病的发病机制还没有想得到充分的研究工作。

越来越多的人开始运用于依此系统对来定义1DF白血病的成果：个微在显现显现出多种去甲自身抗微时转入第1过渡期，显现显现出食欲异常时转入第2过渡期，显现显现出腹泻时转入第3过渡期。一些多发去甲自身抗微非典型的个微，在1期和2期，成果较慢，并持续发展为发病的1DF白血病。我们之后刻画了一组在首次检验到多种去甲自身抗微采样后将近10年无白血病的极慢成果者，这组症状人数少，但特质非常明确。随后，我们发现去甲自身抗体甲基化CD8+T细胞膜重排在成果平稳的症状里大体上不存有，但在近期发病和长期存有的白血病症状里很易于检验到。这有可能表明，与成果症状来得，这些症状自身HIV的恒定减弱。

早期研究工作表明，尽管恒定性T细胞膜(Treg)量也就是说，但白血病症状存有一些机能瑕疵，其里以外对IL-2的重排能力降低。此外，白血病症状里的波动CD4+T细胞膜有可能对恒定更具抵抗性，表现为波动T细胞膜的消除逼近，自然显现显现出的Treg和微外显现显现出的其会Treg，以及抗体境遇的CD4+T细胞膜里IL-2重排逼近。本研究工作的用以是刻画了CD4+恒定性T细胞膜(Treg)在这群人极平稳成果者里的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以群体结合的平行研究工作，在21岁此表显现出院的症状亲属里检查1DF白血病的危险原因。我们之后刻画了长期平稳成果者的特质，他们保证多重去甲自身抗微非典型将近10年，但没有显现显现出白血病的医学腹泻，慢性或非进行时性自身免疫。随后，10名再次保证无白血病并情愿提供大量血清采样的平稳成果者纳入T和B细胞膜机能分析。在目前的研究工作里，8名慢成果者(SP组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身抗微非典型。所有的旁观者都处于1DF白血病成果的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗微对某些抗体的非典型重排，然而，一名症状早就处于2期将近6年，但没有显现显现出医学腹泻，一名症状被确诊为白血病，该受试者72岁，在采集科学实验采样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里对该供微进行时了单独评核。分离外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜术和T细胞膜消除次测试评核供微里Treg的Hz、表DF和机能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和紧接著)进行时无监督聚类分析，评核Treg表DF。

结果：与心理健康供微来得，来自慢成果微的失忆CD4+T细胞膜的监督聚类看显现出，转录的失忆CD4+ TregHz增大，与组胺其会的TNFR关的复合物(GITR)暗示增大有关。一名HbA1c上升时的症状与成果平稳者和给定的小鼠来得，Treg序有所各有不同。机能分析表明，与心理健康供微来得，来自平稳成果微的Treg细胞内的CD4+波动T细胞膜消除明显受损。表现为对波动CD4+T细胞膜CD25和CD134暗示的消除增大。

布1 有系统的表DF分析看显现出，CD4+Treg亚DF在慢成果字段里增大。由FlowSOM生成的Treg楼内，聚集在来自所有供微的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标上物暗示检验显现出10个元簇:失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)运用于9个各有不同Treg标上生成的10个元簇的MST。每个路由器代表一个空降兵(100个空降兵)，很大的元空降兵(10个元空降兵)在路由器组周围上色。每个路由器里的饼布坚称单个标上的暗示级别。(b)每个元聚类的热布，以看显现出整微标上暗示。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成布，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)一般来说重元素为每个metacluster装入新线布(重元素> 0.05%)确切为HD和SP组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞膜(l)。黄色左上角代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 运用于CITRUS的预测模DF证实，TregHz的增大是成果平稳的标志。分级暂时性(a - f)和水果分析(g-k)比较SP旁观者和给定的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群微的代表性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示进行时分离，模拟FlowSOM群微。(b) HD(环纹)和SP(星点)组以及供微SP 606(黄色)里CD25+ cd127的Hz汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性空集的装入新线布;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头突显现出的簇被识别为SP和HD字段之间的各有不同。(j)装入新线布看显现出了在SP(星点)和HD(灰点)组里，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的一般来说重元素(比叛将)。(k)直方布看显现出每个簇的表DF(粉红色)和Treg标上一般来说暗示与故事情节暗示(橙色);上列，存储器Treg_3;上面一行，存储器Treg_4。故事情节与所有其他簇里标上的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon分组符号秩检验

布3 与心理健康献血者来得，成果平稳者失忆treg的GITR增大。每个失忆CD4+T细胞膜元簇(失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个暗示标上的巨大变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的暗示热布(sp606不以外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR暗示串接，看显现出直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon分组符号秩和检验，p< 0.07(黄色)所有供微以外，p< 0.05(橙色)供微SP 606和给定的HD不以外在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR暗示，从分级暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(黄色)串接，看显现出直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon分组符号秩检验

布4 来自平稳成果的CD4+ treg细胞膜管控波动CD4+T细胞膜的能力降低。SP组用橙色的新线和左上角坚称，HD组用红色的新线和左上角坚称，黄色的新线/左上角坚称供微sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被标上为CFSE, Treg按仔细观察的比叛将起始。用抗CD3 /28微珠再生细胞膜，培养3天后进行时流式细胞膜术检验。(a-d)与CD4+转发者一般来说应的treg培养(自微)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除倍数。运用于非典型解读(转录的号召细胞膜不含treg)计算消除倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 波动CD4+T细胞膜对平稳成果的T细胞膜再生的消除更敏感。SP组用橙色的新线和左上角坚称，HD组用红色的新线和左上角坚称，黄色的新线/左上角坚称供微sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标上，treg按仔细观察的比叛将起始。用抗CD3 /28微珠再生细胞膜，培养3天后进行时流式细胞膜术(CD25反染)和细胞膜因长子分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者一同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分比(b)。(c,d) CD25消除百分比(c)和CD134消除百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养里的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得显现出的论点是，来自平稳成果长子的再生失忆CD4+Treg在GITR暗示里想得到了扩展和丰富，强调了必要性研究工作Treg在1DF白血病有可能性个微里的异质性的有效性。

原意显现出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28